Microscopie photonique en champ clair

La microscopie photonique en champ clair est la plus simple et la plus ancienne des techniques de microscopie. Le microscope photonique est un microscope optique car il utilise les lois de l’optique. Il est constitué d’un système de lentilles assurant le grossissement de l’objet à observer. Sur ce type de microscope, l’illumination se fait par transmission de lumière blanche (source halogène). La lumière composée de photons suit le trajet optique du microscope (condenseur, objectif), traverse l’échantillon puis la lentille de l’oculaire et l’œil reçoit l’image agrandie. Les limitations de cette technique sont principalement un faible contraste (pour la plupart échantillons biologiques) et une résolution faible. En contrepartie, la technique est simple à mettre en œuvre et l’échantillon ne nécessite qu’une préparation minime (coloration). Les échantillons observés peuvent être vivants ou fixés.

Vidéos

L’immersion est une technique de microscopie optique permettant d’augmenter le pouvoir résolvant des objectifs en plaçant entre la lentille frontale de l’objectif à immersion et la lamelle, une goutte d’huile (huile à immersion) dont l’indice de réfraction (n = 1,518) est proche de celui du verre (n = 1,515). La présence de cette huile permet un grossissement de x1000. Il n’y a que l’objectif 100X qui peut être utilisé avec de l’huile à immersion. La vidéo ci-dessous montre le passage à l’immersion sur un microscope de type inversé.

Annexes

Le réglage de Köhler est un réglage essentiel en microscopie en champ clair. Il permet d’assurer un éclairage homogène de la préparation, contribue à obtenir une meilleure résolution latérale et un meilleur contraste.
Le réglage de Kölher se réalise en 5 étapes principales :

  1. Mettre en place un échantillon sur la platine porte-objet et mettre au point. Enlever la préparation (la suite du réglage se fera sans échantillon).
  2. Réduire le diaphragme de champ au maximum.
  3. Régler la hauteur du condenseur de manière à ce que les bords de l’image du diaphragme de champ soient nets.
  4. Centrer le diaphragme de champ à l’aide des vis de centrage.
  5. Ouvrir le diaphragme de champ jusqu’à la limite du champ observé, recentrer le diaphragme au fur et à mesure de l’ouverture si nécessaire.

Le microscope droit est un instrument d’optique muni :

  • d’un objectif : c’est la partie la plus importante de l’optique du microscope. L’objectif fournit une image agrandie de l’ objet et se caractérise essentiellement par son pouvoir séparateur ou résolvant.
  • d’un revolver : disque tournant à la partie inférieure du tube optique grâce à un roulement à bille de précision. Il est percé de trois à sept trous à filetage normalisé permettant le vissage des objectifs.
  • d’une commande X Y.
  • d’oculaire : système optique complémentaire de l’objectif. Il est utilisé dans les microscopes pour agrandir l’image produite au plan focal de l’objectif.
  • d’une surplatine.
  • d’une platine porte-objet : rigoureusement perpendiculaire à l’axe optique, elle présente un orifice central permettant le passage des rayons lumineux. Elle reçoit les préparations et est mobile dans toutes les directions.
  • d’une vis macrométrique et micrométrique : un premier mouvement rapide ou macrométrique utilisable pour les faibles grossissements et pour « dégrossir » les forts grossissements et un mouvement lent dit micrométrique pour affiner la mise au point des forts grossissements.
  • d’une source de lumière.
Trajets optiques des microscopes droits et inversés

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