Microscopie confocale et super résolution

Un microscope confocal est un microscope photonique ayant la propriété de réaliser des images de très faible profondeur de champ (en pratique environ 400 nm) appelées « coupes optiques ». Le microscope confocal est composé de sources de lumière de type Laser émettant à différentes longueurs d’onde, de « pinholes » réglables servant de diaphragme dans le trajet optique et de détecteurs spéciaux, le plus souvent des photomultiplicateurs. Il nécessite d’observer des échantillons fluorescents. La particularité de ce microscope est de limiter l’illumination et la détection à un volume de taille réduite. Cette spécificité est liée à la présence de « pinholes » sur le trajet optique qui arrêtent les photons émis hors du plan focal de l’objectif. L’image est donc parfaitement nette. Cette technique permet de réaliser des coupes optiques successives à partir desquelles on peut obtenir une reconstitution tridimensionnelle de l’objet étudié. La microscopie confocale permet d’étudier du matériel fixé, mais également d’étudier des phénomènes dynamiques, sur des cellules ou des tissus vivants, en particulier grâce aux molécules de la famille GFP (Green Fluorescent Protein). Récemment, de nouveaux microscopes ont été développés ; les microscopes de super-résolution à fluorescence. Plusieurs techniques ont été inventées de sorte à dépasser la barrière de diffraction optique conventionnelle qui limite la résolution. Elles sont basées sur des stratégies optiques utilisant l’illumination structurée ou des stratégies moléculaires utilisant des fluorophores photoactivables ou photoconvertibles.